引子合成服務
合成原理
Oligo primer 的人工化學合成始於 50 年代初期,1980 年全自動化的固相引子合成儀問市後,使得快速、高效率合成 Oligo primer 成為可能,大大地推動了生物工程技術的蓬勃發展。現在一般都採用 β-乙腈亞磷醯胺化學合成 Oligo primer,合成是從 3'→5' 方向進行,通常 3' 端的第一個鹼基已結合在 Glass 載體(Controlled Pore Glass,CPG)上。合成的詳細過程如圖,簡要說明如下:
- Step1(Detritylation):脫去附加在 CPG 載體上的第一個鹼基 5'-OH 基團上的保護基(DMTr),預備加入下一個新的鹼基。
- Step2:活化新的鹼基單體 (Phosphoramidite),準備與第一個鹼基進行反應。
- Step3(Coupling):第二個鹼基與第一個鹼基發生偶合反應。
- Step4(Capping):將沒有反應的第一個鹼基的 5'-OH 加帽封死 (Capping),使其不再進一步參與反應。
- Step5(Oxidation):將核苷亞磷酸酯氧化成更穩定的核苷磷酸酯 (即將三價磷氧化成五價磷)。
- 重複進行 Step1~Step5 的步驟,直到合成完所需的 Oligo DNA 序列。
- 合成結束後,將 Oligo DNA 分子從 CPG 上切下,再進行下一步的純化。